|
Объявление
С января 2012 года "Биоклиник" начниает лечение больных ишемической болезнью сердца и постинфарктных больных методом клеточной терапии. Предварительное 3-х годичное наблюдение за такими больными показало снижение функционального класса стенокардии и снижение потребности в лекарствах, при высоком качестве жизни.
Лечение больных РС будет производится циклами строго с 20-го по 30-е число каждого месяца. Просим бронировать места заблаговременно.
Тел.: (8552) 36-09-52 или по
Email: 567611@rambler.ru
Меню → Литература
Наша клиника
| The English version of a site | Русская версия сайта |
 |
 |
|
|
Результаты комплексного лечения рассеяного склероза.
О последствиях подвывихов шейных позвонков
Академик РАМН Сухих Г.Т. о клеточной терапии в РФ |
|
| Пролиферативные потенции мезенхимальных стволовых клеток костного мозга на поверхности титана и золота |
|
Докторов А.А., Денисов-Никольский Ю.И., Воложин А.И., Лосев Ф.Ф., Терехов С.М., Татаренко-Козьмина Т.Ю., Жилкин Б.А., Матвейчук И.В., Мальгинов Н.Н., Тетюхин Д.В., Вольперт У. В., Фролова Е.Н., Янушевич О.О. (НИЦ Биомедицинских технологий (ВИЛАР), ГОУ ВПО “Московский государственный медико-стоматологический университет” (МГМСУ); e-mail: Этот e-mail адрес защищен от спам-ботов, для его просмотра у Вас должен быть включен Javascript ) Введение. В медицинской практике часто требуются реконструктивные операции на костных структурах с применением имплантатов. Наибольший интерес представляют биоактивные пористые деградируемые материалы, сохраняющие достаточную механическую прочность в процессе их замещения костной тканью. По нашим данным особенно перспективны материалы, в состав которых введен гидроксиапатит [1]. В реальности же восстановление естественной структуры кости часто не успевает за деградацией искусственного матрикса. Поэтому, в настоящее время значительное распространение получили не деградируемые материалы. Взаимодействие костных структур с материалом имплантата определяется его химическими свойствами, характеристиками микрорельефа и смачиваемостью поверхности. Для увеличения остеоинтегративных свойств этих материалов исследователи предлагают многочисленные варианты реконструкции их поверхности. При этом задачами обработки являются получение поверхностного слоя костеподобного апатита, уменьшение выделения ионов вещества в ткани, отсутствие цитотоксичности, увеличение адгезии клеток, высокая активность связывания протеинов. Использование мезенхимальных стволовых клеток (МСК) взрослых в тканевой инженерии позволяет придавать остеоиндуктивные свойства материалам, таковыми в обычных условиях не обладающими. Необходимым условием, обеспечивающим их функционирование, является высокая плотность культуры на носителях [3]. В травматологии и челюстно-лицевой хирургии сейчас наиболее широкое распространение получили имплантаты на основе сплавов благородных или просто биоинертных металлов: титана и его сплавов, циркония, золота, платины. Титан и цирконий существенно отличаются от других металлов тем, что на их поверхности спонтанно образуется оксидный слой, на основе которого в свою очередь формируются фосфаты кальция. Таким образом, титан можно рассматривать как биоактивный материал. скрининг материалов, как правило, проводят на клеточных культурах остеобласт-подобных клеток и МСК. При этом обычно прослеживают пропорциональность активности первичной адгезии и распластывания клеток на поверхности материала (до 24 часов) дальнейшей экспрессии маркеров остеогенеза [2]. Считается, что при прочих равных условиях увеличение шероховатости поверхности усиливает адгезию, пролиферацию и фенотипическую экспрессию остеобластов. Задачей данной работы было определение цитотоксичности имплантационных материалов на основе титана и золота, а также их влияния на прикрепление и пролиферацию МСК человека. Тестировали 4 материала: чистый титан марки Grade 4 ASTM F -67-00 (аналог ВТ1-0 ГОСТ 19807-91) c фрезерной обработкой поверхности с шероховатостью Ra 0,63 (1); титан с пескоструйной обработкой поверхности Al2O3 с размером зерна 355-300 мкм (2); титан с плазменным напылением титанового порошка ВТ1-0 с размером зерна 10-20 мкм (3); сусальное золото, ГОСТ 6902 (4). Методы исследования. В работе применяли клеточные культуры фибробластов кожи и МСК человека. С помощью МТТ-теста, а также прижизненной окраски клеток флуоресцеиндиацетатом и бромистым этидием in vitro оценивали цитотоксичность образцов материалов, а также их влияние на прикрепление и пролиферацию клеток. Во всех случаях контролем служили лунки с клетками без образцов. Окраску акридиновым оранжевым и метод СЭМ использовали для определения морфологии клеток. Клетки культивировали на среде ДМЕМ с добавлением 10 % эмбриональной телячьей сыворотки при 37оС в условиях насыщающей влажности в атмосфере с 5% СО2. При определении цитотоксичности клетки высевали с плотностью 50 тысяч на лунку, через 24 часа в лунки вносили образцы и инкубировали 72 часа. В экспериментах по определению эффективности прикрепления МСК их высевали по 60 тысяч на образец и культивировали в течение 3 дней. При оценке эффективности пролиферации МСК высевали по 20 тысяч на образец и культивировали в течение 14 дней. В последнем случае оптическую плотность элюата определяли отдельно как для самого образца, так и для лунки, в которой он находился. Оптическую плотность элюата измеряли на плашечном фотометре “ЭФОС 9305” при длине волны 570 нм. Для сопоставления экспериментальных значений оптической плотности с количеством клеток на образцах была построена калибровочная кривая. С этой целью клетки в известном количестве высевали в лунки 24-х луночного планшета, а на следующий день проводили МТТ-тест. Для изучения организации клеточного слоя методом СЭМ образцы материалов с клетками фиксировали в 2,5% растворе глутарового альдегида и в 2% растворе OsO4, обезвоживали и высушивали в критической точке на аппарате “Hitachi HCP-2”. Полученные препараты напыляли медью в атмосфере аргона на приборе “Balzers SCD 040” и исследовали в сканирующем электронном микроскопе “Philips SEM-515”. Результаты. Поверхность образцов. Рельеф поверхности образцов зависит от способа их обработки (Рис.1). После фрезерования поверхность образца 1 образована параллельными канавками. Неровный, изломанный рельеф образца 2 является следствием пескоструйной обработки. Более сглаженная поверхность с мелкими гранулами в образце 3 отражает напыление титановым порошком. Рельеф образца сусального золота (4) гладкий с неглубокими царапинами и неравномерно расположенными мелкими складками. Цитотоксичность и эффективность прикрепления. При исследовании цитотоксичности для фибробластов кожи и мезенхимальных стволовых клеток человека были получены сходные результаты (Таблица 1). Цитотоксические свойства у изученных материалов не обнаружены. Таблица 1. Оценка цитотоксичности исследованных материалов.
Таблица 2. Прикрепление МСК к поверхности образцов.
Таблица 3. Эффективность пролиферации МСК.
Заключение. Как титан, так и сусальное золото, обладают хорошими адгезивными свойствами для МСК. Пролиферация клеток наиболее активно происходит на образцах из сусального золота. Далее в порядке убывания следуют титан с плазменным напылением, с пескоструйной обработкой и, наконец, с фрезерной обработкой поверхности. Литература. 1.Воложин А.И., Денисов-Никольский Ю. И., Татаренко-Козьмина Т.Ю., Лосев Ф.Ф., Матвеева В.Н., Докторов А.А., Терехов С.М., Дружинина Р.А., Матвейчук И.В., Жилкин Б.А., Краснов А.П. Создание имплантационных материалов нового поколения на основе биостабильных композитов с костными клетками, полученными из стромальных клеток костного мозга // В кн.: Наука - городу Москве, Издание Московского комитета по науке и технике, 2005, т.2. С.36-40. 2.Kudelska-Mazur D., Lewandowska-Szumiel M., Mazur M., Komender J. Osteogenic cell contact with biomaterials influences phenotype expression. Cell Tissue Bank, 2005, 6, 55-64. 3.Oshima H., Rochat A., Kedzia C., Kobayashi K., Barrandon Y. // Morphogenesis and renewal of hair follicles from adult multipotent stem cells // Cell, 2001, v.104, P.233-245. |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||